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凝膠過濾層析的實驗步驟

山東朱氏藥業(yè)集團有限公司2022/11/11 17:14:46

1. 如果凝膠過濾的介質(zhì)是干粉，則需在凝膠過濾緩沖液中完全溶脹。

2. 在遠離過往通道及直接光照的恒溫環(huán)境，將層折柱垂直安裝在穩(wěn)固的實驗室支架上。

3. 用一注射器將凝膠過濾緩沖液從柱子的輸出管注入柱子，至緩沖液達到柱子支持體平面之上，注射器留在輸出端以堵住柱子。

4. 沿著一根順柱子內(nèi)壁而放的玻璃棒將凝膠混懸物倒入柱子至所設高度，再小心往凝膠頂部加入1 cm 高的一層緩沖液，并連接緩沖液貯存容器，取去堵著柱子輸出管的注射器，用2~3倍柱床體積的緩沖液請洗柱子。

5. 流盡柱子凝膠頂部上面的緩沖液、關閉其輸出管。

6. 加入相當于柱床體積1％~5％的蛋白質(zhì)樣品。開放輸出管，讓樣品流進柱床，凝膠上面的柱子內(nèi)壁以緩沖液沖洗。

7. 在凝膠頂上用吸管加入1 cm 高的緩沖液層，重新與緩沖液貯存容器連接，開始洗脫。

8. 分部收集流出液。每分部相當于1％總柱床體積，分別測每個分部的A280，并各取小份樣品測生物活性，選出有活性的分部用SDS-PAGE檢測所含蛋白質(zhì)的數(shù)量和質(zhì)量，合并含目標蛋白的分部。

9. 用2~3個柱床體積的凝膠過濾緩沖液洗柱，柱子保存在含0.02％疊氮鈉的緩沖液中，柱于可無限次地使用。