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單克隆抗體技術(shù)：飼養(yǎng)層細(xì)胞

山東朱氏藥業(yè)集團(tuán)有限公司2022/11/7 21:14:48

在體外的細(xì)胞培養(yǎng)中，單個(gè)的或數(shù)量很少的細(xì)胞不易生存與繁殖，必須加入其它活的細(xì)胞才能使其生長(zhǎng)繁殖，加入的細(xì)胞稱(chēng)之為飼養(yǎng)細(xì)胞（Feeder cell）。在細(xì)胞融合和單克隆的選擇過(guò)程中，就是在少量的或單個(gè)細(xì)胞的基礎(chǔ)上使其生長(zhǎng)繁殖成群體，因此在這一過(guò)程中必須使用飼養(yǎng)細(xì)胞。許多種類(lèi)的動(dòng)物細(xì)胞都可以做飼養(yǎng)細(xì)胞，如正常的脾細(xì)胞、胸腺細(xì)胞、腹腔滲出細(xì)胞等，常選用腹腔滲出細(xì)胞，其中主要是巨噬細(xì)胞和淋巴細(xì)胞。應(yīng)用腹腔滲出細(xì)胞的好處是：一方面做飼養(yǎng)細(xì)胞，另一方面巨噬細(xì)胞可以吞噬死亡的細(xì)胞和細(xì)胞碎片，為融合細(xì)胞的生長(zhǎng)造成良好的環(huán)境。腹腔細(xì)胞的來(lái)源可以是與骨髓瘤細(xì)胞同系鼠。也可以是其他種類(lèi)的小鼠，如C57鼠，昆明小白鼠等。




1．材料




（1）小鼠（Balb/c或C57小白鼠）若干只。




（2）11.6％蔗糖溶液（經(jīng) 10磅30min高壓滅菌）。




2．操作方法




（1）拉頸處死小鼠。




（2）70％酒精浸泡消毒10min。




（3）用手術(shù)剪將小鼠腹部剪開(kāi)一小口，剝開(kāi)皮膚，露出腹腔。




（4）用注射器將4ml 11.6％蔗糖溶液注入腹腔，用手指輕揉1min仍用該注射器回抽腹腔液體，加入離心管。




（5）1 000r／min離心10min。




（6）取上清，以HAT選擇培養(yǎng)液將細(xì)胞制成懸液。臺(tái)盼藍(lán)染色計(jì)數(shù)活細(xì)胞，使每毫升含40萬(wàn)個(gè)活細(xì)胞。




（7）以1ml吸管將細(xì)胞種入微量培養(yǎng)皿，每孔 0.05ml，含2萬(wàn)個(gè)細(xì)胞，放入CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)，即可供細(xì)胞融合和克隆化之用。如果在融合后發(fā)現(xiàn)在培養(yǎng)孔中飼養(yǎng)細(xì)胞數(shù)量少，則可以在細(xì)胞換液時(shí)再加入一些。