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佐劑（adjuvant）的制備和作用

山東朱氏藥業(yè)集團有限公司2022/11/5 17:24:45

一、概念




佐劑（adjuvant）是指能夠增強免疫應答或改變免疫應答類型的物質，應用時可與抗原同時或預先注射于機體。佐劑本身可以有免疫原性，也可以沒有免疫原性。




應用佐劑的目的是為了提高抗原對機體的免疫原性，從而提高抗體的效價。顆粒性抗原（如細菌、細胞）因具有較強的免疫原性，一般情況下不使用佐劑即可取得較好的免疫效果。對于可溶性大分子量的蛋白質免疫原、人工抗原，初次免疫時必須使用佐劑才能取得較好的免疫效果。另外，一般不連續(xù)兩次使用完全弗氏佐劑，以免導致動物嚴重反應。




免疫佐劑的作用歸納起來有：




1、延緩抗原的釋放，保護抗原不被水解，佐劑可延長抗原在體內滯留時間，避免頻繁注射，有利于高親和力抗體的產(chǎn)生；




2、活化巨噬細胞并促進巨噬細胞與T和B細胞的相互作用，從而對淋巴細胞有特異性加強刺激的作用；




3、佐劑吸附了抗原后，增加了抗原的表面積，使抗原易于被巨噬細胞吞噬；




4、佐劑能刺激吞噬細胞對抗原的處理；




5、可刺激致敏淋巴細胞的分裂和漿細胞產(chǎn)生抗體。故免疫佐劑的作用可使無免疫原性物質變成有效的免疫原；




6、可提高機體初次和再次免疫應答的抗體滴變；




7、改變抗體的產(chǎn)生類型以及產(chǎn)生遲發(fā)型變態(tài)反應，并使其增強。




由于佐劑�；煊形⒘康钠渌镔|，這些物質進入機體后也可引起抗體的產(chǎn)生，影響抗體的特異性。注射完全佐劑可引起局部炎癥反應，使局部組織壞死




二、佐劑的制備條件




佐劑的條件作為一種良好的佐劑，必須具備下列條件




1、增加抗原的表面積，并改變抗原的活性基團構型，從而增強抗原的免疫原性；




2、佐劑與抗原混合能延長抗原在局部組織的存留時間，減低抗原的分解速度，使抗原緩慢釋放至淋巴系統(tǒng)中，持續(xù)刺激機體產(chǎn)生高滴度的抗體；




3、佐劑可以直接或間接激活免疫活性細胞并使之增生，從而增強了體液免疫、細胞免疫和非特異性免疫功能；




4、良好的佐劑應具有**性或****的特點。




三、常用佐劑的種類和制備




佐劑主要可分為兩種：一種本身具有免疫原性，如百日咳桿菌、抗酸桿菌（結核分枝桿菌）以及革蘭陰性桿菌等；另一種本身無免疫原性，如氫氧化鋁、磷酸鈣、礦物油乳劑、表面活性劑等。目前應用*多的是弗氏佐劑（Freund adjuvant）。

1、弗氏佐劑




弗氏佐劑是目前動物實驗中*常用的佐劑，分為不完全弗氏佐劑和完全弗氏佐劑。不完全弗氏佐劑是液體石蠟與羊毛脂混合而成，組分比為1～5：1，可根據(jù)需要而定，通常為2：1。不完全佐劑中加卡介苗（*終濃度為2～20mg/ml）或死的結核分枝桿菌，即為完全弗氏佐劑（FCA）。 一般首次注射時用1／2體積FCA加上1／2體積的抗原進行乳化，第二次或第三次注射時用不完全佐劑或不用佐劑。如不加佐劑，則抗原量增大10-20倍。




配制方法：按比例將羊毛脂與石蠟油置容器內，用超聲波使之混勻，高壓滅菌，置4℃下保存?zhèn)溆谩?/p>




在免疫動物前，先將弗氏佐劑與抗原按一定比例混合，佐劑和抗原體積比一般為1：1，制備成"油包水"乳狀液。因為含SDS很易促使其乳化成油包水抗原乳化復合物，注射入動物體內時一定要保持乳化狀態(tài)�？乖昧恳暱乖肿恿坎煌懊庖咴约懊庖邉游锊煌幸欢ú町悾瑹o統(tǒng)一標準和固定模式。一般是每兔（約2kg重）或每羊（約20kg重）第1次注射抗原1mg，以后逐次增加抗原量，*多每次不超過3mg。佐劑與抗原乳化可按如下方法進行：




（1） 研磨法




先將佐劑加熱并取適量放入無菌的玻璃研缽內，待冷卻后再緩緩滴入等體積的抗原溶液，邊滴邊按同一方向研磨，滴加抗原的速度要慢。待抗原**加入后，繼續(xù)研磨一段時間，使之成為乳白色粘稠的油包水乳劑。本法適于制備大量的佐劑抗原，缺點是研缽壁上粘附大量乳劑，抗原損失較大。




（2） 注射器混合法




將等量的弗氏佐劑和抗原溶液分別吸入兩個注射器內，兩注射器之間以一細膠管相連，注意排凈空氣，然后交替推動針管，直至形成粘稠的乳劑為止。本法優(yōu)點是容易做到無菌操作，抗原損失少，適用于制備少量的抗原乳劑。但同時難以乳化完全，個別抗原，用塑料注射器根本推不動，而用玻璃注射器又有滲漏。制備好的乳化劑經(jīng)鑒定才能適用。鑒定方法是將乳化劑滴入冷水中，若保持完整不分散，成滴狀浮于水面，即乳化完全，為合格的油包水劑。




（3） 超聲




實驗室條件好點的，比如說有超聲破碎儀的，一定要控制超聲頻率和時間，超聲容易激發(fā)一些自由基，對抗原有未知損害。乳化方法要根據(jù)抗原和需要而定。




2、氫氧化鋁佐劑




取5％硫酸鋁溶液250ml，在強烈攪拌下加入5％氫氧化鈉溶液100ml，用生理鹽水離心洗滌沉淀2次，再懸入生理鹽水中使達250ml。免疫接種時，取適量氫氧化鋁佐劑加等體積抗原即可免疫。




3、明礬佐劑




鉀鋁礬（硫酸鋁鉀）在一定pH條件下產(chǎn)生氫氧化鋁膠體吸附抗原而產(chǎn)生佐劑效應。制備方法是用生理鹽水溶解蛋白質抗原，在攪拌下緩慢滴入一定量10％ 硫酸鋁鉀溶液，用NaOH調pH到6．5，此時溶液變成乳狀懸液，離心后去掉上清液，沉淀用生理鹽水洗滌二次，加入硫柳汞防腐，4℃保存?zhèn)溆�。明礬佐劑一般用于肌肉注射，皮下注射容易引起肉芽腫和膿腫。




4、脂質體




脂質體包封抗原后，可使抗原延緩釋放，并且脂質體顆粒有刺激機體免疫反應的作用。因此，用脂質體包封的抗原免疫動物可提高免疫效果。