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小鼠免疫實(shí)驗(yàn)

山東朱氏藥業(yè)集團(tuán)有限公司2022/10/24 7:30:20

實(shí)驗(yàn)方法原理

實(shí)驗(yàn)材料 任意品系小鼠（6～8 周）

試劑、試劑盒 PBS完全和不完全弗氏佐劑抗原

儀器、耗材 22－G 注射針頭帶塞的 3 ml 注射器雙頭帶塞的連接器無(wú)菌剪刀剃須刀片解剖刀片木制涂棒

實(shí)驗(yàn)步驟

1. 準(zhǔn)備等體積 PBS 含 25～100 μg 抗原和弗氏完全佐劑的乳化液（200～400 μl/鼠）。用雙頭帶塞的連接器連接兩個(gè)注射器，一個(gè)注射器裝抗原，另一個(gè)裝佐劑。來(lái)回推壓注射器，使得其內(nèi)容物從一側(cè)到另一側(cè)注射器，推壓 5～10 min 直到得到穩(wěn)定的乳化液。

2. 用 22－G 的針給小鼠腹腔注射（每一個(gè)抗原 3～5 只小鼠）。

3. 3 周后，用等體積的含 10～50 μg 抗原的 PBS 和不完全弗氏佐劑配制成（200～400 μl）的乳化液再次腹腔注射。

4. 第二次免疫后 7 天，用無(wú)菌剪刀或剃毛刀片切掉小鼠尾巴 0.5 cm 采血。收集 100～200 μl 血裝于 1.5 ml 的微量離心管。將小鼠放在產(chǎn)熱燈下 30～60 s 保暖或用拇指和食指擠壓尾巴可以方便采血。

5. 血塊形成后，用木制涂棒把血塊從管和表面移走，不要弄破血塊。移走血塊后，用 200μl 的移液器把血清裝入另一微量離心管。經(jīng) ELISA 確定血清抗體滴度。如有需要，用免疫印跡，進(jìn)一步對(duì)抗體定性。

6. 如果滴度太低不能用于融合（≥1/1000），每?jī)芍芙o小鼠加強(qiáng)免疫直至達(dá)到足夠的應(yīng)答。如果采血超過(guò) 3 次，用剃毛刀切開(kāi)一側(cè)尾靜脈采血。

7. 當(dāng)抗體滴度足夠高時(shí)（≥1/1000），融合前 3 天，但要在前一次免疫的 2 周后，用含 10～50 μg 抗原的 PBS 溶液腹腔注射（200～400μl）或經(jīng)皮下尾靜脈（50～100μl）注射加強(qiáng)免疫。

8. 在強(qiáng)化免疫的 3 天后進(jìn)行細(xì)胞融合。




注意事項(xiàng)

處理弗氏佐劑要小心，因?yàn)樽宰⑸鋾?huì)產(chǎn)生陽(yáng)性的 TB 試驗(yàn)，導(dǎo)致肉芽腫樣反應(yīng)。