企業(yè)資訊

裸鼠腫瘤模型建立方法簡述

山東朱氏藥業(yè)集團有限公司2022/10/23 6:18:10

裸鼠腫瘤模型是比較常見和常用的一種腫瘤動物模型，它在皮下移植瘤腫瘤模型的建立中起到重要作用。裸鼠腫瘤模型的接種一般有細胞接種和瘤塊接種兩種方式，接種取材有手術(shù)活檢標(biāo)本、癌性胸腹水標(biāo)本和體外培養(yǎng)的細胞系三種。裸鼠移植瘤模型的建立具有建立周期短、成瘤率高、易于操作、成本低的優(yōu)點，當(dāng)然，這種腫瘤模型也有缺陷，即不能很準(zhǔn)確的模擬正常人體腫瘤發(fā)生發(fā)展的過程。美迪西藥理學(xué)服務(wù)可以為客戶提供裸鼠成瘤、裸鼠皮下成瘤等試驗來進行醫(yī)藥方面的研究。1、裸鼠腫瘤細胞移植時的簡要步驟首先準(zhǔn)備好要移植的腫瘤細胞（細胞量根據(jù)不同腫瘤略有不同，例如所用的前列腺癌細胞系每個移植點一般選擇 1x106左右；腫瘤細胞可與基質(zhì)膠 1:1 混勻后用 1 ml 注射器吸取，基質(zhì)膠能夠給腫瘤細胞提供營養(yǎng)環(huán)境，有助于腫瘤細胞生長）。戴無菌手套后，將小鼠用左手大拇指和食指捏住頸部皮膚，然后將鼠尾用左手無名指和小指固定于左手大魚際。將腋窩或腹股溝用 75％ 酒精消毒 3 次。右手持吸有腫瘤細胞和基質(zhì)膠混合液的注射器，在腹股溝或腋窩的位置，45 度斜角進針，注意不要突破腹膜，將針頭保持于皮下位置。然后近水平位置將針頭幾乎完全插入皮下，將混有基質(zhì)膠的腫瘤細胞注射入皮下（腫瘤細胞量約 1x106），快速退針，左手食指輕壓針孔約 1 min 后將小鼠放回飼養(yǎng)籠中，注意將小鼠側(cè)放于墊料上，放置其不適嘔吐時嘔吐物誤入呼吸道引起窒息。2～3 h 后觀察小鼠是否蘇醒。如果是利用腫瘤組織（人體腫瘤標(biāo)本或小鼠移植瘤傳代）建立裸鼠皮下移植瘤模型，則需要首先將腫瘤組織用無菌 PBS（或 1640 培養(yǎng)基）洗滌 3 次，然后在無菌平皿上切成或用無菌剪刀剪成<1 mm3 體積的小塊（種植前可裹基質(zhì)膠）備用。將小鼠用水合氯醛麻醉后平臥于解剖板上，四肢用膠帶固定，將腋窩或腹股溝用 75％ 酒精消毒 3 次，然后用眼科剪剪開約 0.5 cm 小口，小鑷子將皮下筋膜與皮膚分開，然后將腫瘤組織放入貼近腹股溝或腋窩的深部，每個位置放置 2～3 塊腫瘤組織，注意不同組間統(tǒng)一放置腫瘤組織塊數(shù)以保持一致。然后縫合皮膚，消毒后將小鼠側(cè)臥位放置于飼養(yǎng)籠的墊料上。2～3 h 后觀察小鼠是否蘇醒。2、裸鼠腫瘤模型肺原位成瘤方法介紹實驗步驟：（1）、準(zhǔn)備足量細胞,將處于對數(shù)生長期的各實驗組成瘤細胞胰酶消化后,完全培養(yǎng)基重懸成細胞懸液；（2）、用血球計數(shù)板對細胞進行計數(shù),并*終用一定體積基質(zhì)膠重懸,使細胞懸液的濃度為 2E+7個細胞/ml(以2E+6/只接種量)；（3）、準(zhǔn)備好腫瘤細胞后(2E+7/mL),使用一次性胰島注射器,吸取細胞懸液,肺原位注射。每只100ul；（4）、每周一次在活體成像儀下觀察成瘤情況:按 10μl/g 的量腹腔注射D-Luciferin(15mg/mL),過 15分鐘以后,使用活體成像儀器自帶氣體麻醉系統(tǒng)進行異氟烷氣體麻醉,然后將 其放置于活體成像儀下進行成像,觀察熒光,保存數(shù)據(jù)；（5）、根據(jù)不同腫瘤細胞原位成瘤能力強弱不同適時結(jié)束實驗,結(jié)束前對小鼠進行活體成像,方法同上。成像結(jié)束后,對實驗動物進行注射過量2％液體麻醉劑(0.5mL)安樂致死,待其完全昏迷再進行頸椎脫臵確認死亡；（6）、用醫(yī)用剪刀和醫(yī)用鑷子解剖動物,觀察其肺部及瘤體組織;使用游標(biāo)卡尺測量瘤體長寬,計算腫瘤體積;使用精密天平稱取瘤體及肺重量；（7）、根據(jù)活體成像結(jié)果觀察肝臟、淋巴、脾臟等其他器官組織,看是否有出現(xiàn)轉(zhuǎn)移灶; 并取下進行觀察；（8）、將取出的肺、瘤體等器官組織,按照客戶要求,放于4％多聚甲醛固定常溫保存或液氮冷凍后-80°保存,以備送樣。小鼠實驗?zāi)[瘤動物模型構(gòu)建關(guān)鍵要細心，尤其是腫瘤細胞選擇，腫瘤組織塊處理上要仔細認真，這是影響模型成功建立的關(guān)鍵，還有移植手術(shù)時更要耐心細致，不要還沒有建立就已經(jīng)失敗。