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病毒的培養(yǎng)方法實(shí)驗(yàn)——雞胚培養(yǎng)法

山東朱氏藥業(yè)集團(tuán)有限公司2022/10/22 23:29:16

病毒必須在易感的活細(xì)胞內(nèi)才能增殖，因此，根據(jù)不同病毒選擇敏感動(dòng)物，離體組織細(xì)胞和雞胚進(jìn)行分離培養(yǎng)。

實(shí)驗(yàn)方法原理雞胚培養(yǎng)方法操作簡(jiǎn)便，適用于流感病毒，痘病毒，皰疹病毒和腦炎病毒等的培養(yǎng)。*常用的雞胚接種方法有四種，即絨毛尿囊膜接種法，羊膜腔（羊水囊）接種法，尿囊腔接種法和卵黃囊接種法。根據(jù)不同病毒和不同目的采用適宜的接種方法。實(shí)驗(yàn)步驟

1.  雞胚的檢查




將9～11 日齡雞胚置于檢卵器上，照視觀察雞胚是否生活，根據(jù)①小血管是否清晰；②胚胎是否活動(dòng)，觀察小雞的眼睛黑點(diǎn)是否移動(dòng)。如果雞胚不動(dòng)，血管昏暗模糊，變黑或蒼白都表示已死亡。




2.  接種




用鉛筆標(biāo)明天然氣室及雞胚位置，然后在絨毛尿囊膜發(fā)育區(qū)〈照視時(shí)呈現(xiàn)紅色〉近胚位處的氣室邊緣作一記號(hào)，定為注射入口。




用碘酒消毒注射入口和天然氣室端的蛋殼，再用電鉆，口腔科用牙鉆和小銼刀，于注射入口和天然氣室端的蛋殼上鋸一小孔，勿傷及卵膜。




用大頭針通過(guò)火焰消毒后刺穿氣室端所開(kāi)小孔的卵膜，這樣可避免在注射時(shí)液體回流出來(lái)。




將雞胚橫臥于蛋架上，用無(wú)菌l 毫升注射器抽取病毒液體，針頭與卵殼成30（交角，由注射器小孔剌入0.5～1.0 厘米，注0.1～0.2 毫升。




注射完畢，用膠布封口，封口前膠布用碘酒消毒，并通過(guò)火焰燒去余碘，用過(guò)的注射器用煮沸法消毒，雞胚放入35～37 ℃培養(yǎng)。




注射后次日，逐日觀察雞胚生活情況，孵育48～72小時(shí)后移入4℃冰箱過(guò)夜。注意雞胚必須直立，令氣室端朝上。




收獲尿囊液之前取出雞胚，用碘酒消毒氣室端，并將鑷子擊破氣室端卵殼，沿氣室邊緣小心打開(kāi)一大缺口，然后用小鑷子撕去卵膜及撕破絨毛尿囊膜，*后用毛細(xì)管吸取尿囊液，一般可吸得4～5 毫升。




滴定尿囊液的病毒血凝效價(jià)。

展開(kāi) 注意事項(xiàng)尿囊接種法適用于某些呼吸道病毒如流感，副流感，新城雞瘟等病毒之培養(yǎng)，唯分離培養(yǎng)不如羊膜腔接種法的陽(yáng)性率高。