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薄層色譜點(diǎn)樣選購(gòu)指南、操作技巧、注意事項(xiàng)（一）

山東朱氏藥業(yè)集團(tuán)有限公司2022/10/20 8:58:08

薄層色譜點(diǎn)樣

點(diǎn)樣方法

點(diǎn)樣除另有規(guī)定外，用點(diǎn)樣器點(diǎn)樣于薄層板上，一般為圓點(diǎn)，點(diǎn)樣基線距底邊2.0cm，樣點(diǎn)直徑及點(diǎn)間距離同紙色譜法，點(diǎn)間距離可視斑點(diǎn)擴(kuò)散情況以不影響檢出為宜。點(diǎn)樣時(shí)必須注意勿損傷薄層表面。點(diǎn)樣直徑不超過5mm，點(diǎn)樣距離一般為1~1.5cm即可。樣品在溶劑中的溶解度很大，原點(diǎn)將呈空心環(huán)——環(huán)形色譜效應(yīng)。因此配制樣品溶液時(shí)應(yīng)選擇對(duì)組分溶解度相對(duì)較小的溶劑。點(diǎn)樣方式有點(diǎn)狀點(diǎn)樣和帶狀點(diǎn)樣。




怎樣提高點(diǎn)樣效率?

點(diǎn)樣是造成TLC定量誤差的主要來源。實(shí)驗(yàn)證明：定量毛細(xì)管更適合較小體積的點(diǎn)樣；微量注射器更適合較大體積的點(diǎn)樣。這主要是因?yàn)槲⒘孔⑸淦魇苄馀�、溶液回爬現(xiàn)象的影響較大。為避免不同定量毛細(xì)管間的點(diǎn)樣誤差、建議一塊薄層板上*好用同一只定量毛細(xì)管。但應(yīng)注意更換樣品時(shí)，應(yīng)將毛細(xì)管用超1聲bo或不同極性溶劑清洗干凈。在制備樣品時(shí)，溶樣溶劑黏度不能過高，以便于點(diǎn)樣；溶劑沸點(diǎn)過低則進(jìn)樣體積易變，過高則會(huì)改變展開劑組成；對(duì)樣品溶解度過高會(huì)使樣點(diǎn)發(fā)生空心現(xiàn)象；常用的溶劑為甲醇、乙醇、**。經(jīng)典TLC樣點(diǎn)原點(diǎn)一般為直徑3mm點(diǎn)間距1--2cm 底邊距1.5cm；HPLC樣點(diǎn)原點(diǎn)一般為直徑1mm點(diǎn)間距5mm 底邊距1cm。

不同溶劑對(duì)樣品的洗脫能力不同，因此在點(diǎn)樣的同時(shí)，樣品在原點(diǎn)開始呈環(huán)形展開，如果樣品在溶劑中的溶解度很大，原點(diǎn)將變成空心環(huán)，Kaiser稱這種現(xiàn)象為“點(diǎn)樣環(huán)形色譜效應(yīng)”。這種效應(yīng)對(duì)隨后的線形展開造成不良影響，因此配制樣品溶液時(shí)應(yīng)選用對(duì)組分溶解度相對(duì)較小的溶劑；溶劑的粘度不宜過高，以便于點(diǎn)樣，溶劑的沸點(diǎn)要適中，沸點(diǎn)過低由于揮發(fā)會(huì)改變樣品溶液濃度導(dǎo)致較大誤差，沸點(diǎn)過高，樣品溶液的溶劑會(huì)在原點(diǎn)殘留，導(dǎo)致改變展開劑的選擇性，特別是樣品溶液的溶劑與展開劑的極性相差較大時(shí)更為明顯，*常用的溶劑為甲醇及乙醇，有時(shí)也用丙酮。點(diǎn)樣后必須將溶劑**除去后再進(jìn)行展開，但要避免高溫加熱，以免改變待測(cè)成分的性質(zhì)。（長(zhǎng)沙德之瑞儀器科技有限公司定量毛細(xì)管）

點(diǎn)樣方式、點(diǎn)樣量及點(diǎn)樣設(shè)備的選擇決定于分析的目的、樣品溶液的濃度及被測(cè)物質(zhì)的檢出靈敏度。

點(diǎn)樣體積經(jīng)典薄層一般為1-5μl，高效薄層為100-500nl，樣品溶液濃度一般在0.01％-1.00％范圍內(nèi)，點(diǎn)樣過多會(huì)造成原點(diǎn)“超載”，展開劑產(chǎn)生“繞行”現(xiàn)象使斑點(diǎn)拖尾或重疊，使掃描峰形不對(duì)稱或不能基線分離，并由于超載得到非線性的校正曲線，嚴(yán)重影響定量結(jié)果，降低準(zhǔn)確度。

經(jīng)典薄層的原點(diǎn)直徑*大不得超過5mm，一般3mm較為合適，高效薄層原點(diǎn)直徑約為1-2mm，盡可能避免多次點(diǎn)樣，原點(diǎn)直徑過大會(huì)降低分辨率及分離度。

經(jīng)典薄層起始線距底邊約1.5cm，高效薄層為1cm，展距前者為10-15cm，后者為5-7cm，對(duì)于難分離的化合物用多元展開劑展開時(shí)，注意原點(diǎn)與展開劑的距離每次要保持一致，否則由于色譜分離*初行為的差異而導(dǎo)致分離失敗。

點(diǎn)與點(diǎn)的間距經(jīng)典薄層為1-2cm，高效薄層為0.5cm，用具自動(dòng)換行功能的薄層掃描儀時(shí)，斑點(diǎn)之間的距離必須十分**，才能正確地掃描每行的色斑，得到好的測(cè)定結(jié)果，圖7-3-1為一般的點(diǎn)樣圖解。

在點(diǎn)樣前，應(yīng)將薄層板在日光及紫外光下檢查板面有無損壞或污染，選擇合格的薄層板后決定用點(diǎn)狀點(diǎn)樣還是用帶狀點(diǎn)樣。為此，瑞士CAMAG公司生產(chǎn)了系列點(diǎn)樣設(shè)備以供選用，這些設(shè)備只適用于硬板。下面是常用的點(diǎn)樣方式及設(shè)備。 （長(zhǎng)沙德之瑞儀器科技有限公司定量毛細(xì)管）




（一）點(diǎn)狀點(diǎn)樣




如果僅僅為了定性，用內(nèi)徑約0.5mm管口平整的毛細(xì)管或微量注射器將樣品溶液點(diǎn)在距薄層底邊約2cm處，點(diǎn)樣直徑不超過5mm，點(diǎn)間距約為1-1.5cm即可。




為進(jìn)行定量，借毛細(xì)作用吸樣的定容管有兩種，一是容積為0.5、1、2、3、4及5μl的德之瑞定量毛細(xì)管（Microcaps），另一種是100及200nl的鉑銥合金定量毛細(xì)管（Nanopipette）；注射器式的可變體積的點(diǎn)樣器有50-230nl的毫微點(diǎn)樣器（Nano-Applicator）及0.5-2.3μl的微量點(diǎn)樣器（Micro-Applicator），用于需要調(diào)節(jié)體積及沒有毛細(xì)作用的鍵合相薄層的點(diǎn)樣。




毛細(xì)管式的微量點(diǎn)樣器裝在手動(dòng)的Nanomat型點(diǎn)樣裝置的磁性點(diǎn)樣頭上，點(diǎn)樣頭裝在彈簧上。按下此點(diǎn)樣頭，毛細(xì)管借恒定的壓力接觸薄層表面。點(diǎn)間距離由帶準(zhǔn)確的#44 間隔的E字形缺刻裝置控制，CAMAG Nanomat Ⅲ型手動(dòng)點(diǎn)樣器，適用于普通或高效薄層板，點(diǎn)樣體積**，樣品原點(diǎn)小，原點(diǎn)間隔定位準(zhǔn)確；注射器式的毫微點(diǎn)樣器及微量點(diǎn)樣器由測(cè)微尺控制，也可與Nanomat型點(diǎn)樣裝置配合，以使點(diǎn)樣位置**。




電動(dòng)的Nanomat Ⅲ型點(diǎn)樣裝置完全適用于上述**點(diǎn)樣器的配套使用，并且還可以自動(dòng)控制點(diǎn)樣次數(shù)，點(diǎn)樣器在薄居上的停留時(shí)間，以及點(diǎn)樣器接觸薄層的速度。還可避免手持毛細(xì)管點(diǎn)樣時(shí)的用力不勻，由于靠機(jī)械控制接觸板面，壓力恒定。此外，還有可以用于環(huán)形展開及向心展開的薄層點(diǎn)樣裝置。